Methods: Investigación Experimental. Muestra: La cepas de referencia: S. mutans ATCC 35668/25175 y S. sobrinus ATTC 33478 y 10 aislados clínicos de S mutans y sobrinus obtenidos por recolección de saliva estimulada de escolares entre 6 y 8 años, con experiencia de caries dental. Se empleará Agar Mitis Salivarius (Difco Laboratories, Detroit, MI) suplementado con 0,2U/ml de bacitracina y con 0,001% de Tellurite de potasio. Después de la incubación, las colonias presuntivas serán subcultivadas en agar Mitis Salivarius igualmente suplementado, hasta obtener aislados puros; la identificación se realizará con API 20 Strep. Para la obtención del extracto crudo de proteínas se empleará un procedimiento de lisis bacteriana y se cuantificaran proteínas totales por el método de Bradford. Se conformarán cuatro grupos de tratamiento: a)Propóleo: 5 concentraciones distintas, b)Clorhexidina al 0,12% (Periogard®), c)Etanol y d)Control. En cada grupo se realizara una observación para la producción glucanos con la técnica ácido dinitrosalicílico, la expresión del ARNm en la síntesis de la primera cadena se realizara con iniciadores dirigidos a la región 5’ del dominio catalítico de los genes gtfB, gtfC y gtfD con PCR tiempo real e iniciadores con las secuencias de regiones hipervariables de cada gen. El tamaño esperado de los productos para los genes gtfB, gtfC, and gtfD son 98pb, 93pb y 83pb, respectivamente. Se amplificará el gen recA de S. mutans como patrón de referencia de genes y expresión constitutiva.
Results:
Se espera el propóleo será un agente antiséptico capaz de inhibir la expresión gtf de S. mutans y S. sobrinus en presencia de sacarosa.
Conclusions: Proyecto