Actividad de Proteasas en Saliva de Pacientes con Enfermedad Periodontal

Introducción: La respuesta del organismo a la enfermedad periodontal (EP) incluye la producción enzimas liberadas por las células estromales, epiteliales y por las bacterias y aquéllas propias de la saliva que pueden variar su actividad. El estudio de proteasas en la saliva puede contribuir a clarificar la patogénesis y mejorar el diagnóstico precoz de la EP. Objetivo: Estudiar la actividad de proteasas en saliva de pacientes con EP. Métodos: Previo consentimiento informado, participaron 5 adultos: Controles (1) y pacientes con periodontitis crónica de moderada a severa (3) con gingivitis (1). Antes de obtener las muestras de saliva, los pacientes estuvieron, al menos 1-2 h, sin comer, beber, ni realizar higiene bucal. Se colectaron 2 mL de saliva no estimulada. Para realizar la zimografía se preparó un gel separador con 2,16 mL de acril/bisacrilamida 30%, 0,8 mL de gelatina, 2,88 mL de agua y 2,24 mL de tampón Tris-HCl 1,5 M a pH 8.8. Se colocó en cada bolsillo 20 μg de proteínas salivales. La corrida electroforética se realizó a 75 V por 3 h, en frío. Luego el gel fue lavado 3 veces por 20 min con solución de Tritón X-100 al 2,5%. Posteriormente se incubó entre 6-12 h con tampón de digestión a 37 ºC, en agitación. Luego se tiñó con azul de Coomassie Resultados: La zimografía de los pacientes con periodontitis crónica de moderada a severa muestra una gran actividad proteolítica, la cual no se observa en el control sano o en el paciente con gingivitis. La mayor parte de dicha actividad de proteasas se encuentra entre 140 y 50 kDa y entre 45 y 40 kDa, coincidiendo con las masa moleculares de las colagenasas salivales. Mayor cantidad de pacientes están siendo estudiados. Conclusión: La zimografía muestra actividad de proteasas aumentada en pacientes con EP. PG-03-7186-2008/1 CDCH-UCV